Spectrophotomètre de plaque

Cet appareil sert à faire des suivis cinétique ou à titrer des réactions à différentes longueurs d’ondes (possibilité de tracer les spectres sur l’ensemble des longueurs d’ondes) par absorbance, fluorescence ou luminescence sur des faibles volumes disposés dans des micro-plaques.

Spectrophotomètre à monochromateur de plaque multi-modes (TECAN)
Cadre d’utilisation	Le principe des mesures est de reproduire in vitro la mise en contact des particules atmosphériques (en utilisant des poinçons réalisés sur les filtres) avec du fluide pulmonaire reconstitué (solution « gamble »), ce qui reproduit les conditions physiologiques d’inhalation. On ajoute à des prises d’essai de l’échantillon à tester différentes solutions reproduisant les antioxydants pulmonaires. L’objectif est de mesurer la capacité intrinsèque des particules (PM) à oxyder le milieu pulmonaire pour y créer un stress oxydatif (mécanisme clé à l’origine de nombreuses pathologies cardio-respiratoires liées à l’exposition à la pollution atmosphérique), via l’apport ou la production d’espèces réactives de l’oxygène (ROS).
Caractéristiques techniques	Types d’échantillons Les filtres de prélèvement des PM sont extraits par agitation dans la solution de fluide pulmonaire artificiel Gamble, cet extrait n’étant pas filtré avant analyse. Données techniques Spectrophotomètre à monochromateur de plaque multi-modes : absorbance, fluorescence, luminescence. 3 appareils sont disponibles à l’IGE. Modèles TECAN infinite M200, M-Plex et M1000 pro avec injecteurs. Logiciel I control v 1.12 et Magellan. Ces appareils acceptent tout type de plaque (noire, UV-transparente, transparente, coatée, non-coatée) de 6 à 384 puits. Types d’analyses A l’IGE, nous utilisons à l’heure actuelle trois méthodologies complémentaires : •Test avec l’acide ascorbique (AA) antioxydant pulmonaire particulièrement sensible aux métaux et aux traceurs de la combustion du bois. •Test au dithiothreitol (DTT) est un substitut d’antioxydant pulmonaire (fort réducteur) sensible aux molécules organiques et métalliques, •Test à la dichlorofluorescine (DCFH) dont l’oxydation conduit à la formation d’une espèce fluorescente. Ce test est moins spécifique AA ou DTT car il est sensible à de nombreuses espèces réactives de l’oxygène mais aussi de l’azote.
Contrôle-Qualité.	Naphtoquinone, échantillon contrôle (filtre toit) à chaque batch
Responsable(s) de l’outil, Équipe à contacter	– Responsable scientifique Gaëlle Uzu gaelle.uzu ird.fr   – Responsable technique Takoua Mhadhbi rhabira.elazzouzi univ-grenoble-alpes.fr